CRISPR-Cas9技術利用短RNA(gRNA)來引導核酸酶(Cas9)到達DNA靶點。該技術使用簡單而且擴展性強,已被廣泛應用于實驗室研究、生物醫(yī)學研究、動植物基因工程等領域。包括建立各種遺傳修飾的模式生物模型、建立基因調控(如敲除、插入、抑制、激活)細胞系、動植物育種、遺傳疾病修復、癌癥等重大疾病治療以及相關藥物靶點篩選等。
泓迅生物提供sgRNA質粒構建服務,針對不同物種(動物、植物等)提供多種質粒構建方案,匹配實驗所用材料,提高質粒構建的成功率,為您提供快速、優(yōu)質的sgRNA載體構建服務。
步驟 | 服務內容 | |
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明確物種和載體 | 不同物種不同載體 | |
設計靶點 | 一般在不同轉錄產物的共同外顯子上設計3-5個靶點,盡可能破壞重要的domain和所有轉錄產物isoform。 | |
合成 | 合成前確認檢測靶點是否存在SNP(如果存在SNP,則不能用T7E1酶檢測是否存在突變) | |
靶點切割活性檢測 | 293T細胞內檢測SSA活性 | 酶體外切割活性驗證(推薦) |
內源活性驗證 (有條件選擇) |
若目的細胞轉染率高,如293T細胞,可轉染72h后提基因組,擴增靶序列,T7E1酶切驗證,進一步測序驗證。 |