宿主細(xì)胞的選擇取決于病毒載體的類型和目標(biāo)應(yīng)用，常用的宿主細(xì)胞包括HEK293T、HeLa、COS-7等，這些細(xì)胞系易于培養(yǎng)且適合病毒的復(fù)制和包裝。

病毒顆粒通常在-80℃以下儲(chǔ)存，并在運(yùn)輸過程中使用干冰或冰袋保持低溫，以保持病毒的活性和穩(wěn)定性。

簡單來說，原核基因編輯相差不大，我們目前使用的是CRISPR/Cas9基因編輯。真核Cas12a更有優(yōu)勢。

與Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，質(zhì)?；虻鞍赘菀走M(jìn)入細(xì)胞

2 從經(jīng)濟(jì)方面來講，Cas12a用crRNA進(jìn)行編輯，crRNA約40-44nt，其合成的價(jià)格遠(yuǎn)低于sgRNA(約100nt)

3 識別位點(diǎn)PAM序列不同。Cas12a核酸酶識別5’-TTTV，切割產(chǎn)生交錯(cuò)末端。Cas9切割產(chǎn)生平末端

1.同源重組

2.核酸酶

重組膠原蛋白是利用基因工程技術(shù)，通過特定的表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌、酵母、昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)等）在體外生產(chǎn)出來的膠原蛋白。它與人體自然產(chǎn)生的膠原蛋白具有相同的氨基酸序列，因此具有很高的生物相容性和功能性。

1. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞

2. 酵母

3. 大腸桿菌

影響基因合成的因素主要包括：序列長度、DNA結(jié)構(gòu)（重復(fù)序列、GC含量等因素）和宿主細(xì)胞穩(wěn)定性等因素來決定。

每三個(gè)堿基表達(dá)一個(gè)氨基酸，移碼現(xiàn)象是由于基因中增加或減少非三及三的倍數(shù)個(gè)堿基，會(huì)使得該位點(diǎn)后面的DNA序列產(chǎn)生移碼現(xiàn)象，導(dǎo)致表達(dá)出來的蛋白非目的蛋白。

密碼子偏好性是指不同的生物，對簡并密碼子使用頻率不相同。

可能是由于引物設(shè)計(jì)不合理、模板質(zhì)量不高或PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤等原因?qū)е碌摹?/p>

穿梭載體含有兩個(gè)或更多親緣關(guān)系不同的復(fù)制子，這意味著它們能夠在兩種或多種不同的生物體中復(fù)制。例如，某些穿梭載體既能在原核生物（如大腸桿菌）中復(fù)制，又能在真核生物（如酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞）中復(fù)制。

穿梭載體通常含有選擇性標(biāo)記，如抗生素抗性基因等。這些標(biāo)記基因使得研究人員能夠方便地通過特定的篩選條件（如抗生素選擇）來檢測和篩選含有目的基因的克隆。

穿梭載體在導(dǎo)入目標(biāo)生物體系時(shí)通常具有較高的效率。此外，穿梭載體在目標(biāo)生物體系中的表達(dá)通常也相對穩(wěn)定，這有助于減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果的波動(dòng)性和不確定性。